Bepaling van oksaalsuurinhoud in vrugte en groente deur middel van hoëprestasievloeistofchromatografie (HPLC)

Bepaling van Oksaalsuur Inhoud in vrugte en groente deur middel van hoëprestasievloeistofchromatografie (HPLC)
1. Eksperimentele Beginsel en Metode-ontwerp
As 'n algemene organiese suur in vrugte en groente, beïnvloed oksaalsuurinhoud direk die smaak en voedingswaarde van voedsel. Hierdie eksperiment gebruik omgekeerde-fase hoëprestasievloeistofchromatografie (RP-HPLC). Onder suur mobiele fase-toestande word oksaalsuur basislyn-geskei van interfererende stowwe met behulp van 'n C18-chromatografiese kolom. 'n Ultravioletdetektor wat op 210 nm gestel is, word gebruik vir kwantitatiewe analise, gebaseer op die UV-absorpsie-eienskappe van die karboksielgroepe in oksaalsuurmolekules.
2. Standaardkurwe en monstervoorbereiding
'n Gradiëntverdunningsmetode word gebruik om standaardoplossings voor te berei: weeg akkuraat 25.0 mg oksaalsuurdihidraat af en verdun tot 25 ml met ultrasuiwer water om 'n 1 mg/ml-voorraadoplossing te verkry. Dit word opeenvolgend verdun in 'n reeks standaardoplossings teen 50, 100, 200, 400 en 800 µg/ml, met elke konsentrasie in drievoud ingespuit.
Vir monstervoorbereiding word mikrogolf-ondersteunde ekstraksie gebruik: weeg 5.00 g vrugte-/groentehomogenaat af, voeg 10 mL 0.1 mol/L soutsuuroplossing by, behandel by 60°C met mikrogolf vir 10 minute, filtreer deur 'n 0.45 µm membraanfilter en versamel die filtraat vir toetsing.
3. Optimalisering van Chromatografiese Toestande
Die mobiele fase is 'n 0.01 mol/L kaliumdiwaterstoffosfaatbuffer (pH 2.5)-asetonitriel (95:5) stelsel, met 'n vloeitempo van 0.8 mL/min en kolomtemperatuur van 35°C. Aanpassing van die asetonitriel-verhouding toon dat wanneer die organiese fase 10% oorskry, die retensietyd van oksaalsuur verkort tot minder as 3 minute, maar piekstertvorming vind plaas. Onder die finale geoptimaliseerde toestande is die retensietyd van oksaalsuur 4.2 minute, wat volledige skeiding van aangrensende sitroensuur en appelsuur bereik (resolusie > 1.5).
4. Metodevalidering
Lineêre reeksverifikasie toon 'n goeie lineêre verband tussen piekarea en konsentrasie in die reeks van 10–1000 µg/mL (R² = 0.9993). Die deteksielimiet (LOD), bepaal deur die sein-tot-ruisverhouding-metode, is 0.5 µg/mL. In herhaalbaarheidstoetse is die RSD vir ses herhalingsbepalings van dieselfde spinasiemonster 1.8%. Piekherwinningseksperimente op drie vlakke (80%, 100% en 120%) lewer gemiddelde herwinnings van onderskeidelik 98.2%, 102.4% en 97.8%, wat voldoen aan die vereistes vir kwantitatiewe analise.
5. Analise van Werklike Monsters
Ses kommersieel beskikbare vrugte en groente is getoets: spinasie (356 ± 12 mg/100 g), seldery (215 ± 9 mg/100 g), tamatie (18 ± 2 mg/100 g), appel (6 ± 1 mg/100 g), piesang (nie opgespoor nie), en broccoli (89 ± 5 mg/100 g). 'n Vergelyking met die nasionale standaardmetode (GB 5009.277-2016) toon dat die relatiewe afwyking tussen die twee metodes minder as 5% is, wat die betroubaarheid van hierdie metode bevestig. In die besonder toon die HPLC-metode hoër sensitiwiteit as tradisionele titrasiemetodes wanneer lae-inhoud monsters geanaliseer word.
6. Sleutelnotas
Beheer die pH-waarde streng tydens monstervoorbehandeling. Indien die pH van die ekstrak 3 oorskry, sal kalsiumoksalaatpresipitasie tot lae toetsresultate lei. Die mobiele fase moet daagliks vars voorberei word om soutpresipitasie en kolomblokkasie te vermy. Spoel die kolom na elke 20 inspuitings vir 30 minute met asetonitriel-water (30:70) om kolomdoeltreffendheidsvermindering te voorkom. Vir pigmentbevattende monsters (bv. pers kool) word dit aanbeveel om 'n vastefase-ekstraksie-suiweringstap voor inspuiting by te voeg.
7. Toepassings- en Uitbreidingsaanwysings
Hierdie metode kan uitgebrei word na die opsporing van oksaalsuur in biologiese monsters soos urine en bloed. Deur die samestelling van die mobiele fase aan te pas (bv. deur tetrabutielammoniumhidroksied by te voeg), kan oksaalsuur en sy metaboliete gelyktydig bepaal word. Gekombineer met 'n massaspektrometriedetektor kan 'n meer akkurate spooropsporingsmetode gevestig word. In die voedselverwerkingsbedryf kan hierdie metode belangrike data-ondersteuning bied vir die seleksie van lae-oksaalsuurvariëteite en die optimalisering van kookprosesse.